文献类型： 中文期刊

作者： 单兴根 ¹ ; 田祥强 ² ; 王佳玲 ² ; 谢维娜 ¹ ; 田朋 ¹ ; 胡志群 ¹ ; 高永恒 ¹ ; 嵇辛勤 ³ ; 吴金节 ¹ ; 胡青海 ² ;

作者机构： 1.安徽农业大学动物科技学院

2.中国农业科学院上海兽医研究所

3.贵州大学动物科学学院

关键词： 鸭疫里默氏杆菌;Ⅸ型分泌系统（T9SS）;基因缺失;生物被膜;致病性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 1001-1007,1018

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究鸭疫里默氏杆菌（RA） IX型分泌系统（T9SS）分泌的假定蛋白AS87＿05150的功能，本研究采用自杀质粒同源重组的方法构建RA Yb2株AS87＿05150基因缺失株Yb2Δ5150及其回补株cYb2Δ5150，经PCR及测序鉴定，结果显示AS87＿05150基因缺失株Yb2Δ5150和回补株cYb2Δ5150均正确构建，缺失株的表型为16S r RNA⁺AS87＿05150 ORF^-，回补株的表型为16S r RNA⁺AS87＿05150 ORF⁺。采用荧光定量PCR （qPCR）检测Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株AS87＿05150基因的转录水平；根据上述3株菌不同时间的OD_600nm值绘制各菌株的生长曲线；采用微量结晶紫法检测各菌株生物被膜（BF）的形成能力；将10⁷ cfu/孔的Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株分别感染Vero细胞，检测各菌株对Vero细胞的黏附和侵袭力。q PCR检测结果显示，cYb2Δ5150株中AS87＿05150 m RNA相对转录水平比Yb2株高约19倍（P＜0.0001）,Yb2Δ5150株未扩增到AS87＿05150基因；生长曲线结果显示，Yb2Δ5150与Yb2株的生长曲线基本一致，但cYb2Δ5150生长速度与Yb2Δ5150株相比极显著下降（P＜0.01）;BF测定结果显示，Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株BF的形成能力与Yb2株相比均极显著降低（P＜0.0001）；黏附和侵袭力结果显示，这3株菌对Vero细胞的黏附和侵袭力均无显著差异。将3株菌分别以10⁸ cfu/只～10⁴ cfu/只、10¹⁰ cfu/只～10⁶ cfu/只和10⁹ cfu/只～10⁵ cfu/只的剂量经肌肉注射接种雏鸭，感染后观察雏鸭的发病情况，并采用Reed-Muench法计算3株菌对雏鸭的半数致死量(LD₅₀)；将3株菌均以10⁷ cfu/只经肌肉注射感染雏鸭，24 h后剖杀，无菌采集各组鸭血液、肝脏和脑组织，作相应处理后涂板采用平板计数法测定载菌量。根据各组鸭的死亡情况，计算Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株的LD₅₀分别为6.85×10⁵ cfu、8.75×10⁷ cfu和4.681×10⁸ cfu，即缺失株LD₅₀比野生株高约127倍，但回补株的LD₅₀比缺失株高约5倍。载菌量测定结果显示，Yb2Δ5150株和cYb2Δ5150株感染鸭血液、肝脏、脑组织中的细菌载量比Yb2株感染鸭的载菌量均极显著降低（P＜0.001），但前两者之间上述指标均无显著差异。本实验结果表明AS87＿05150与RA Yb2株的BF形成和致病性相关，但回补株对雏鸭的毒力和致病性均未回复到野生株的水平。本研究为进一步解析RA AS87＿05150的功能及分子致病机制等奠定了基础。