文献类型： 中文期刊

作者： 陈红丽 ¹ ; 彭祥然 ² ; 李孝良 ² ; Bismark Kyei ² ; 尚瑞沙 ² ; 齐静茹 ² ; 张轶岭 ² ; 徐莉 ² ; 沈中元 ³ ;

作者机构： 1.江苏科技大学生物技术学院;中国农业科学院蚕业研究所

2.;江苏科技大学生物技术学院;中国农业科学院蚕业研究所

3.;江苏科技大学生物技术学院;中国农业科学院蚕业研究所;

关键词： 家蚕微孢子虫;己糖激酶;基因克隆;序列特征;原核表达

期刊名称： 蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 70-76

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 己糖激酶(hexokinase,HXK)是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝(NBO_1320g0001,NBO_27g0008)。根据其中的一个基因拷贝(NBO_27g0008)序列设计特异性引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板成功克隆了该基因,命名为Nb HXK-1。该基因大小为894 bp,包含完整的ORF,编码297个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为34.241 k D,等电点(p I)为5.26,蛋白质的氨基酸序列有31个磷酸化位点和4个潜在的N-糖基化位点,无跨膜结构域,有信号肽,二级结构主要由α螺旋(54.55%)、延伸片段(17.80%)和无规则卷曲(27.61%)组成。系统进化分析显示Nb HXK-1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)己糖激酶(Nc HXK)氨基酸序列的亲缘关系较近。将Nb HXK-1基因插入原核表达载体p ET-28a(+)并转化BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达后经蛋白质串联质谱鉴定和Western blot分析显示,获得了与预期大小一致的约35 k D的重组Nb HXK-1蛋白,为进一步阐明Nb HXK-1的生物学功能奠定了基础。