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猪鼻支原体LAMP快速诊断检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 刘博婷 1 ; 彭凌 2 ; 陈晓彤 3 ;

作者机构： 1.韶关学院英东生命科学学院

2.韶关学院英东生物工程学院

3.韶关学院英东生命科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-韶关学院动物疫病诊断中心联合实验室韶关学院

关键词： 猪鼻支原体;环介导等温扩增技术

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 05 期

页码： 621-625

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以猪鼻支原体的P37基因序列为靶基因,设计1组特异性引物,对反应体系的引物浓度、MgSO_4、dNTPs、反应温度和时间进行优化,并进行了特异性和灵敏度试验,旨在建立猪鼻支原体(Mhr)的简便、快速、准确的分子检测方法。同时应用所建立的方法对临床样品进行检测,结果显示,最佳反应体系为MgSO_46 mmol/L,dNTPs 1.2 mmol/L,内引物(FIP/BIP)1.6 μmol/L,外引物(F3/B3)0.2 μmol/L,Bst DNA聚合酶8 U,60℃扩增60 min。灵敏度是常规PCR的100倍并且与其他病原菌无任何交叉反应。对23份呼吸道疾病临床样品进行检测的结果显示,普通PCR和LAMP的检出率分别为23.4%和79.6%。表明建立的LAMP检测方法可以用于Mhr的常规检疫。

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