文献类型： 中文期刊

作者： 刘博婷 ¹ ; 李肇高 ¹ ; 严舒焕 ¹ ; 李荣君 ¹ ; 蔡巩林 ¹ ; 林锦铨 ¹ ; 彭凌 ¹ ;

作者机构： 1.韶关学院英东生物与农业学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-韶关学院动物疫病诊断中心联合实验室韶关学院

关键词： 猪丹毒丝菌;表达;spaA基因;纯化

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 12-16

摘要： [目的]在大肠杆菌中表达猪丹毒丝菌spaA基因并纯化重组蛋白。[方法]利用PCR扩增猪丹毒丝菌临床分离株spaA基因,构建重组质粒p GEX-4T-1-spaA,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达融合蛋白GST-SpaA,并优化表达条件。最后采用GST琼脂糖纯化树脂纯化,SDS-PAGE和Western Blotting检测。[结果]成功扩增spaA基因,获得重组表达菌株BL21(DE3)/p GEX-4T-1-spaA;在菌体OD_(600)为0. 9时,加入IPTG至终浓度0. 1 mmol/L,34℃诱导6 h的条件下表达效果最好。经SDS-PAGE检测和纯化后得到大小为97 kDa的GST-SpaA; Western Blotting检测结果表明,GST-SpaA具有良好的免疫原性。[结论]成功在大肠杆菌中表达了SpaA蛋白,经纯化得到具有免疫原性的重组蛋白,为后续研制猪丹毒丝菌SpaA蛋白亚单位疫苗奠定基础。