文献类型： 中文期刊

作者： 高艳 ¹ ; 都兴洋 ² ; 郭茹 ¹ ; 潘青 ¹ ; 张峣 ¹ ; 杨帆 ¹ ; 张宇 ¹ ; 刘景利 ¹ ; 秦运安 ¹ ; 祁小乐 ¹ ; 高玉龙 ¹ ; 刘慧敏 ¹ ; 高宏雷 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/禽免疫抑制病创新团队/黑龙江省兽用生物药物工程技术研究中心

2.黄埔海关技术中心

关键词： LMH细胞;悬浮驯化;禽腺病毒8型

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 012 期

页码： 1277-1283

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为实现禽腺病毒8b型（FAdV-8b）的无血清悬浮细胞的培养工艺，并评价利用该工艺培养FAdV-8b制备的灭活疫苗的免疫效力，本研究采用贴壁的鸡肝癌上皮细胞（LMH细胞）逐步降低培养基中血清含量的方法，筛选适应低血清生长的贴壁细胞株，将其驯化成无血清悬浮生长的LMH细胞，命名为LMH-S。结果显示，经无血清驯化后的悬浮LMH-S细胞增殖稳定，存活率在90%以上。优化摇瓶的接毒工艺，确定摇瓶悬浮培养FAdV-8b工艺为1‰体积比接种病毒，96 h收获病毒。将LMH-S细胞接入Eppendon DASGIP 4联平行生物反应器中培养72 h后，按照体积比1‰接入FAdV-8b,96 h收获病毒测定病毒含量。结果显示，生物反应器中制备的FAdV-8b效价可达108.5TCID50/mL，利用其制备的灭活疫苗以1 mL/只剂量免疫2周龄SPF鸡评估该疫苗的安全性。以0.5 mL/只免疫2周龄SPF鸡，于免疫后7 d、14 d分别采血，采用ELISA方法检测各组鸡血清中的抗体水平，于免疫后14 d攻击FAdV-8b强毒株。观察攻毒后各组鸡的临床症状及各脏器的剖检变化，采集肝脏病料样品制备病理切片，采用荧光定量PCR方法检测鸡肝脏中的病毒载量。结果显示疫苗的安全性良好。抗体检测结果显示，免疫后7 d抗体无转阳，免疫后14 d抗体的阳转率为73.3%(11/15)。攻毒后4 d剖检免疫组鸡的肝脏均正常；对照组鸡肝脏均有肿大，有的肝脏呈土黄色，质脆，个别有点状出血；病理切片观察可见，免疫组鸡肝细胞仅有一定程度变性，对照组鸡肝细胞广泛变性、局部肝细胞坏死并伴有大量炎性细胞浸润。病毒载量检测结果显示，攻毒后4 d对照鸡肝脏病毒载量极显著高于免疫组鸡（P<0.0001），攻毒后14 d对照组鸡肝脏的病毒载量仍高于免疫组（P>0.05）。攻毒后14 d所有组鸡肝脏均无明显变化。上述结果表明通过悬浮培养LMH-S细胞制备的FAdV-8b灭活疫苗安全性良好，免疫后可以诱导鸡产生较强的体液免疫反应，并能为免疫鸡提供较好的免疫保护。本研究为FAdV-8无血清悬浮培养放大工艺及疫苗的研制提供了重要的参考依据。