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猪源GSDMA蛋白多克隆抗体的制备与初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 李帅 1 ; 宋洁 1 ; 周仕君 1 ; 刘佳 1 ; 李江南 1 ; 翁长江 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队

关键词： GSDMA;原核表达;多克隆抗体;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1311-1316+1331

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： Gasdermin A（GSDMA）作为Gasdermin（GSDM）蛋白家族的一员，参与细胞的炎症反应，其经切割产生的片段可以诱导细胞焦亡。为制备猪GSDMA（pGSDMA）多克隆抗体，本研究构建了重组表达质粒pET-21apGSDMA，转化BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导，表达并纯化了重组pGSDMA蛋白。将纯化的该重组蛋白免疫小鼠制备pGSDMA多克隆抗体（pAb），并进行western blot和间接免疫荧光试验鉴定。结果显示，pGSDMA pAb能够特异性地识别外源表达的pGSDMA蛋白和猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中内源表达的pGSDMA蛋白。利用该pAb检测猪主要组织器官中pGSDMA蛋白的表达，结果显示其能识别猪不同组织器官中的pGSDMA蛋白，且pGSDMA在猪心脏中的表达量最低，在肝、脾、肺和肾中的表达量较高。利用该pAb检测不同剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）感染PAMs中p GSDMA的表达，结果显示pGSDMA蛋白的表达量随着病毒感染剂量的增加而降低，表明pGSDMA在HP-PRRSV感染过程中发挥相关生物学作用。本研究首次制备了pGSDMA pAb，为深入探究pGSDMA生物学功能奠定了基础。

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