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一种谷氨酸棒杆菌4-异丙基苯甲酸诱导型启动子的设计与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 毋舒宁 1 ; 苏永平 1 ; 李冬雪 2 ; 柏映国 2 ; 刘波 3 ; 张志伟 1 ;

作者机构： 1.山西农业大学林学院

2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

3.中国农业科学院生物技术研究所

关键词： 谷氨酸棒杆菌;诱导型启动子;阻遏蛋白CymR;4-异丙基苯甲酸

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 108-116

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物，挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子PH10上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO，构建了4-异丙基苯甲酸（Cumate）为诱导剂的启动子PH10-CuO。【结果】绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示，无诱导剂时，谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低；以25 μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导12 h时，谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达62 000，证明PH10-CuO具有很好的严谨性和诱导表达强度。构建了以启动子PH10-CuO调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒，实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入。【结论】诱导型启动子PH10-CuO具有表达强度高且渗漏表达低的特点，可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达。

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