文献类型： 中文期刊

作者： 李晓涵 ¹ ; 杨伏春 ¹ ; 刘芮 ¹ ; 高立 ¹ ; 崔红玉 ¹ ; 张艳萍 ¹ ; 刘长军 ¹ ; 祁小乐 ¹ ; 王笑梅 ¹ ; 高玉龙 ¹ ; 李凯 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队

关键词： 鸡传染性法氏囊病;火鸡疱疹病毒;VP2基因;生物学特性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 656-662

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鸡传染性法氏囊病（IBD）是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒（HVT）活载体疫苗，本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体，获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下，连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应，构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测，并绘制重组病毒体外生长曲线，分析其体外复制特性。结果表明，重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白，rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体，并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础，对IBD的防控具有重要意义。