文献类型： 中文期刊

作者： 刘彦玲 ¹ ; 裴艳艳 ¹ ; 李敏杰 ¹ ; 杨德成 ¹ ; 王海伟 ¹ ; 于力 ¹ ; 田志军 ¹ ; 周国辉 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪病综合防控创新团队

关键词： 口蹄疫病毒;P1-2A-3C基因;重组腺病毒;免疫原性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 006 期

页码： 636-641

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答.为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,经双酶切鉴定正确后采用同源重组方法构建重组腺病毒rAdV-P12A3C,传代后经PCR鉴定,结果显示各代次均检测到预期的3.5 kb的目的条带,获得了 rAdV-P12A3C.将rAdV-P12A3C连续传代后,分别利用IFA和western blot检测rAdV-P12A3C第2、4、6、8代时外源基因在293细胞中的表达情况.结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中均能够稳定表达.将其感染293细胞后测定rAdV-P12A3C各时间点的病毒效价并绘制一步生长曲线,结果显示,该rAdV-P12A3C传至第8代时病毒效价可达7.2×108TCID50/mL,各时间点病毒效价与亲本病毒差异均不显著,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响.将rAdV-P12A3C免疫BALB/c小鼠,对BALB/c小鼠采血并分离血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体,结果显示,rAdV-P12A3C免疫组、O型FMDV灭活疫苗组及rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组BALB/c小鼠均在首免后7周(二免后3周)VP1抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,且rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组产生的VP 1抗体水平极显著高于另外两个免疫组(P<0.001).表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体.本研究结果首次表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在小鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了基础.