文献类型： 中文期刊

作者： 裴艳艳 ¹ ; 张梦琳 ¹ ; 许浒 ¹ ; 相丽润 ¹ ; 张洪亮 ¹ ; 彭金美 ¹ ; 王倩 ¹ ; 田志军 ¹ ; 周国辉 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 胞内劳森氏菌;间接ELISA;抗体检测;LI0841重组蛋白

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 001 期

页码： 55-60,69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪增生性肠病（PPE），通常被称为猪回肠炎（PI），由胞内劳森氏菌（LI）感染引起。为建立检测LI抗体的间接ELISA方法，本研究构建LI外膜蛋白基因（LI0841）的重组表达质粒p ET28a-LI0841，经测序无误后转化BL21（DE3）宿主菌，经IPTG诱导表达，采用SDS-PAGE检测重组蛋白LI0841蛋白（rLI0841）的表达形式，经Ni柱纯化后采用western blot鉴定其反应原性。SDS-PAGE结果显示，在32 ku处出现目的条带，且其主要以可溶性形式表达；western blot结果显示，r LI0841能够与兔LI多克隆抗体特异性反应，表明纯化的r LI0841具有较强的反应原性，可作为包被抗原用于建立间接ELISA检测方法，经各反应条件优化初步建立LI抗体的间接ELISA检测方法。各反应条件的优化结果显示，4.38 ng/孔的r LI0841以4℃过夜包被最佳；血清最佳稀释度为1∶100,37℃反应0.5 h；羊抗猪Ig G-HRP最佳稀释度为1∶10 000,37℃作用0.5 h;TMB底物37℃显色15 min。利用建立的间接ELISA方法检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌及经美国Biostone PPE抗体检测试剂盒检测为阳性的猪血清，评估该方法的特异性；将LI阳性血清2倍倍比稀释（1∶100～1∶51 200）后，采用本研究建立的间接ELISA方法检测，评估该方法的敏感性；以同一批次和不同批次包被的酶标板分别检测5份不同LI抗体水平的猪血清，评估该方法的重复性。结果显示，该方法除能检测到LI阳性血清外，其余相关病原的阳性血清均为阴性，特异性较强；LI阳性血清1∶800稀释时检测结果仍为阳性，敏感性较高；对5份不同抗体水平的LI阳性血清的批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%，重复性较好。利用该ELISA方法与美国Biostone公司PPE抗体检测试剂盒同时检测104份临床猪血清样品，比较二者的检测结果，并计算二者的符合率；采用建立的间接ELISA方法检测黑龙江、吉林等地区413份临床猪血清样品，分析LI在上述地区的流行状况。结果显示，两种方法的阳性符合率为90.91%，阴性符合率为91.84%，总符合率为91.35%;413份临床猪血清样品中LI的阳性检出率为59.81%（247/413），表明LI在黑龙江、吉林等地区的猪群中普遍存在。本研究建立了检测LI抗体的间接ELISA方法，该方法特异性强、敏感性高、重复性与准确性均较好，为临床PI血清流行病学调查提供技术支持。