文献类型： 中文期刊
作者： 赵寿经 1 ; 李昌禹 2 ; 骆晓佩 1 ; 钱延春 1 ; 战文宗 1 ; 孙琳 1 ;
作者机构： 1.吉林大学生物与农业工程学院
2.中国农业科学院特产研究所
关键词： rolC基因的表达;人参皂苷;PCR扩增;人参发根;表达载体构建
期刊名称： 中国生物工程杂志
ISSN： 1003-3505
年卷期： 2004 年 24 卷 09 期
页码： 58-62
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据Slightom等RiA4TL DNA序列分析结果 ,设计了一对引物 ,以Ri 质粒DNA为模板 ,利用PCR方法对rolC基因进行了扩增。利用pGEM T载体对rolC基因进行了克隆和测序。结果 ,克隆的DNA片段序列与报道的ORF1 2阅读框内的rolC序列一致。将pGEM T rolC用限制性内切酶SacI酶切 ,与经SmaI酶切CIAP去磷酸化的pUC1 9质粒重组 ,经蓝白斑筛选得到正向重组的pUC1 9 rolC。再用Xbal SacI双酶切pUC1 9 rolC与pBI1 2 1 ,将rolC基因定向克隆到具有CaMV35S启动子的pBI1 2 1表达质粒上 ,构建成植物表达载体pBI rolC。用pBI rolC转化农杆菌LBA440 4构建成的LBA440 4 (pBI rolC)工程菌转化人参子叶 ,获得发根的表达。经PCR扩增分子检测 ,证明rolC基因确已整合到人参发根基因组中。经对转化的人参发根中单体皂苷含量测定 ,发现发根中含有所检测的 7种人参单体皂苷 ,总皂苷含量达 1 8 5 5mg g。
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