文献类型: 中文期刊
作者: 翟云云 1 ; 李佳佳 1 ; 张爽 1 ; 任子昱 1 ; 金前跃 2 ; 杜永坤 1 ; 万博 1 ;
作者机构: 1.河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心
2.河南省动物免疫学重点实验室
关键词: 伪狂犬病病毒;凋亡相关斑点样蛋白;先天性免疫;猪肾上皮细胞
期刊名称: 畜牧兽医学报
ISSN:
年卷期: 2021 年 002 期
页码: 478-487
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响。以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)ASC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ASC基因对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PK-15以及PK15-ASC-/-细胞感染PRV-GFP病毒的增殖差异;RT-PCR检测PRV-gB及IFN-β、ISG15、IL-1β mRNA表达水平;Western blot检测PRV gE蛋白的表达;TCID50检测子代病毒感染力的滴定。结果表明:两对特异性sgRNA均能对ASC进行基因编辑,但经过T7核酸酶酶切检测进行基因编辑效率分析,结果表明,sgRNA2的基因编辑效率最高;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,PK-15以及PK15-ASC-/-细胞活力无影响;流式细胞仪检测结果表明PRV-GFP在PK15-ASC-/-细胞中的增殖显著低于PK-15细胞;定量RT-PCR结果表明,PRV-gB基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著低于PK-15细胞,而IFN-β、ISG15基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著高于PK-15细胞;Western blot结果表明,PRV的gE蛋白在PK15-ASC-/-细胞中的表达显著低于PK-15细胞;滴度测定结果表明敲除ASC基因能够显著抑制子代病毒的增殖能力。本研究成功构建了PK15-ASC-/-细胞系,并通过PRV感染试验证实敲除ASC基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖。
- 相关文献
[1]伪狂犬病病毒Ea株ORF-1基因在BHK-21细胞上的表达. 徐引弟,陈焕春,肖少波. 2009
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