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牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王倩颖 1 ; 杨森 1 ; 刘可欣 1 ; 王超 1 ; 孙飞雁 1 ; 张淑琴 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所;黑龙江省农业科学院黑龙江农业科技杂志社

关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒;检测方法;gD基因;实时荧光定量PCR

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 31 卷 006 期

页码： 140-145

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的快速定量检测方法,本研究针对IBRV基因组gD序列保守区域设计特异性扩增引物,扩增的目的片段大小为105 bp,将其克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒标准品pMD-gD-IBRV,优化反应体系后,建立了快速检测IBRV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.该方法特异性较强,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法敏感性高,对重组质粒标准品的最低检出限达4.8 × 100 copies/μL,高于常规PCR方法;批内、批间重复性试验的变异系数均小于2%,表明该方法重复性良好;该方法检测的样本阳性率高于常规PCR方法,利用该方法检测牛场送检的106份临床样品,结果显示IBRV的阳性率为36.7%,常规PCR检测方法检测显示阳性率为33.0%,二者符合率为96.2%,表明该方法更适用于临床样品检测.本研究建立的IBRV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、快速高效,对于IBRV的检测和流行病学调查具有重要意义.

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[1]牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立. 刘占悝,刘泽余,李智杰,孙飞雁,郭利. 2020

[2]牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 刘占悝,刘泽余,李智杰,孙飞雁,郭利. 2020

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[19]牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达. 王海燕,朱远茂,薛飞,童光志,赵立平,相文华,韩文瑜. 2006

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