科研产出
几丁质酶3样蛋白1纳米抗体的筛选与鉴定
《畜牧兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)在感染甲型流感病毒(IAV)后,表达水平发生显著变化,暗示其可能参与抗病毒免疫反应的调控.然而,当前尚未发现CHI3L1与IAV之间的直接相互作用.由于CHI3L1在免疫过程中可能具有重要作用,研究者推测其可能在调节抗病毒免疫中扮演关键角色.然而,现有的研究工具不足,迫切需要开发一种高效的CHI3L1检测方法,以助力后续的研究工作.因此本研究以CHI3L1为目标蛋白,通过构建CHI3L1真核表达质粒,成功进行了体外表达与纯化,并使用该纯化蛋白免疫羊驼.通过4次免疫后,采集羊驼外周血并分离淋巴细胞,测定抗体水平达到了 1∶64 000,符合构建噬菌体展示文库的标准.随后,利用巢式PCR扩增了单个重链可变区(VHH)基因,并将该基因克隆至pComb噬菌体载体,成功构建了一个库容量为1.2×108 cfu·mL-1的CHI3L1纳米抗体噬菌体展示文库.通过三轮的免疫亲和筛选和富集,筛选得到四株不同序列的特异性纳米抗体(Nb).随后,研究进一步构建了 CHI3L1特异性纳米抗体的真核表达质粒,并转染293F细胞进行表达,使用Protein A亲和纯化系统纯化了所表达的蛋白.经ELISA测定,Nb-YC8和Nb-YC4显示出较好的亲和力.利用Western blot进一步验证了这些纳米抗体与商品化抗体相比,能够正确识别CHI3L1蛋白.免疫荧光分析显示,Nb-YC4、Nb-YD10和Nb-YF8能够识别293T细胞中表达的CHI3L1蛋白,而Nb-YC8未能成功识别CHI3L1,推测其可能识别的是线性表位.本研究成功筛选并鉴定了 4株具有不同亲和力的CHI3L1特异性纳米抗体,这些抗体有望成为研究机体免疫系统中CHI3L1功能的有力工具.通过对CHI3L1的进一步研究,可能有助于揭示其在抗病毒免疫反应中的潜在作用,并为开发基于CHI3L1的诊断或治疗手段提供基础.
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羊支原体肺炎病原三重PCR检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：羊支原体肺炎是由多种支原体引起的一类疾病的总称，在我国报道的病原主要包括绵羊肺炎支原体（Mo）、山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）和丝状支原体山羊亚种（Mmc）等。为了建立一种能够快速鉴别Mo、Mccp、Mmc的方法，本研究通过基因组共线性分析，鉴定3种羊支原体基因组特异性区间，设计了3种羊支原体特异性引物共计87条，从中筛选出1套三重PCR检测引物，建立了Mo、Mccp、Mmc三重PCR检测方法，对该方法进行优化后，开展特异性、灵敏度试验以及临床样本检测。结果显示，利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法，能特异性扩增出3个目的条带：Mo(467 bp)、Mccp(668 bp)、Mmc(310 bp)，探索出最佳延伸时间和退火温度分别为10 s和56℃，与牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等其他病原无交叉反应；对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数分别为10～2copies/μL、10～1copies/μL和10～2copies/μL。结果表明，本研究建立的三重PCR方法可用于Mo、Mccp、Mmc感染的快速鉴别诊断及流行病学调查，具有临床便捷、诊断快速的特点。
关键词： 羊支原体肺炎 多重PCR 绵羊肺炎支原体 山羊支原体山羊肺炎亚种 丝状支原体山羊亚种
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施肥对旱地农田土壤水分及玉米产量的影响
《植物营养与肥料学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探明施肥对旱地土壤水分以及作物产量的影响，为指导旱地合理施肥、提升土壤肥力和提高资源利用效率提供科学依据。【方法】田间试验于2018年在山西寿阳进行，种植作物为春玉米。试验以不施肥为对照（CK），设置单施有机肥、单施化肥以及有机无机肥配施3种肥料类型处理，每种肥料类型下又设置低肥（50 kg/hm2）、中肥（150 kg/hm2）及高肥（250 kg/hm2） 3个施肥量（以N计），共10个处理。于2022年玉米收获期和2023年玉米播种前、收获期，调查农田土壤蓄水效率和水分蒸发量，生育期农田耗水量，以及玉米产量及其构成因素。【结果】与不施肥CK相比，单施化肥处理的休闲期蓄水增加量、水分蒸发量和休闲期蓄水效率无显著变化；单施有机肥处理休闲期蓄水效率提高了89.1%；有机无机肥配施休闲期蓄水增加量显著提高了49.1 mm，水分蒸发量降低了50.7 mm，休闲期蓄水效率提高了157.6%。在低施肥量下，有机肥处理休闲期土壤蓄水增加量较化肥处理增加86.2%，休闲期土壤水分蒸发量降低33.8%，休闲期蓄水效率显著提升304.5%，而有机无机肥配施处理低、中和高施肥量下休闲期土壤蓄水增加量分别较化肥处理显著增加148.1%、245.8%和88.3%，休闲期土壤水分蒸发量分别显著降低39.8%、105.8%和48.6%，休闲期蓄水效率分别显著提升358.7%、337.5%和88.3%。与CK相比，单施化肥和有机无机肥配施处理的玉米产量分别显著提升了107.9%和121.7%，百粒重分别增加23.9%和29.1%，单位面积穗数分别增加23.2%和22.6%，玉米水分利用效率分别显著提升了96.5%和104.3%。中、高施肥量下，单施化肥和有机无机肥配施处理的玉米产量、百粒重、单位面积穗数、水分和降雨利用效率均无显著差异，但均高于有机肥单施处理。【结论】施用化肥能有效提高玉米产量和水分利用效率，但休闲期土壤蓄存效率较差；施有机肥可增加土壤休闲期蓄水效率，然而即使高施肥量条件下玉米产量和水分利用效率仍相对较低。相比之下，有机无机肥配施处理可在中量（150 kg/hm2）和高量（250 kg/hm2）施肥条件下，有效促进水肥协调，保障玉米高产稳产，同时提高水分利用效率，是旱地玉米最佳施肥方式。
关键词： 旱地玉米 休闲蓄水效率 施肥水平 水分利用效率 玉米产量
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双低菜粕和膨化双低菜粕及添加比例对肉鸡生长性能及血清生化指标的影响
《中国粮油学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：研究膨化处理对双低菜粕营养成分、抗营养因子含量的影响,双低菜粕和膨化双低菜粕不同添加比例对肉鸡生长性能及血清生化指标的影响,得出不同类型双低菜粕在肉鸡饲粮中的适宜添加比例.选择双低菜粕进行膨化实验,测定膨化前后营养成分和抗营养因子含量.养殖实验选用21日龄爱拔益加肉鸡共864只,随机分为8个处理,每个处理6个重复,每个重复18只鸡.实验饲粮中分别添加质量分数为5%、10%、15%、20%的双低菜粕和膨化双低菜粕,进行为期28 d的养殖实验(预饲期7 d,正式实验21 d),实验前期饲喂常规饲粮.结果表明:1)膨化处理可显著提高双低菜粕的蛋白质体外消化率(P<0.05),显著降低硫苷、芥子碱等抗营养因子含量(P<0.05),显著降低蛋白质溶解度(P<0.05).2)随着饲粮中双低菜粕添加比例的提高,肉鸡的日采食量、平均日增重、末重显著下降(P<0.05),料重比显著上升(P<0.05);血清中谷草转氨酶含量显著下降(P<0.05);甲状腺滤泡逐渐出现增生、弥漫性水肿现象.3)随着饲粮中膨化双低菜粕添加比例的提高,肉鸡的平均日采食量、平均日增重、末重显著上升(P<0.05),料重比总体呈下降趋势;血清中谷丙转氨酶含量显著上升(P<0.05);甲状腺滤泡同样出现增生现象,并伴随着间质水肿现象.4)在相同添加比例下,膨化双低菜粕组肉鸡的生长性能及血清生化指标总体上优于双低菜粕.双低菜粕在肉鸡饲粮中的添加质量分数不宜超过10%,膨化双低菜粕不宜超过15%.
关键词： 肉鸡 双低菜粕 挤压膨化 生长性能 血清生化指标 抗营养因子
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牛传染性鼻气管炎病毒流行株分离鉴定及感染性分析
《微生物学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：[目的]进一步掌握当前我国牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)流行株的分子特征及生物学特性,为科学防控牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)提供病原学参考.[方法]采集牛肺脏组织,利用PCR方法检测牛呼吸道常见病毒;使用MDBK细胞分离病毒,并应用病毒宏基因组测序技术测定与分析病毒的全基因组序列;蚀斑纯化病毒,连续传至第 9 代(F9),测定病毒TCID50、绘制一步生长曲线并观察病毒粒子形态;将F9 代细胞毒以滴鼻方式接种 2 头IBRV抗体阴性健康成年牛,每鼻孔 2.5 mL,同时让1 头牛与之同居,观察体温和排毒变化等临床表现.[结果]PCR检测显示,该牛肺脏组织含有IBRV和牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV).接种MDBK细胞传至第 3 代时出现明显细胞病变,宏基因组测序确定为IBRV,其基因组全长为 134 678 bp,命名为IBRV GSLT/04/2024 株.F9代病毒TCID50 为 105.5 TCID50/mL,且gB、gC、gD和gE基因均未发生突变.依据gC基因和全基因组序列将该毒株划分为IBRV 1.2b亚型谱系.牛滴鼻后第 5 天开始向外排毒,同居牛第 10 天开始向外排毒,约持续排毒 10 d,排毒量依次为鼻拭子>口拭子>肛拭子>眼拭子;接种第 30 天仅从结肠组织中检测出IBRV基因;接种牛约于第 7 天、同居牛第 10 天出现IBR特异性抗体.[结论]本研究成功分离出 1 株新的IBRV 1.2b亚型流行毒株,初步证明其对成年牛具有较强感染能力,这为进一步溯源我国IBRV感染率增高现象提供了重要的流行病学和病原学依据.
关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒 分离 鉴定 遗传变异分析
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真核载体疫苗的创新性设计与优化:以艾美耳球虫为例
《中国农业大学学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：目前，病毒载体疫苗已在人用和兽用领域实现商业化应用，而细菌及寄生虫载体疫苗虽在基础研究方面取得进展，却尚未突破产业化瓶颈，其核心问题在于载体系统的设计与优化亟待理论创新和技术突破。本综述聚焦我国学者原创性提出的艾美耳球虫疫苗载体系统，系统阐释寄生虫等真核载体的分子设计原理、优化策略及免疫增效机制。结果表明：1）真核载体疫苗的效能提升可概括为“一体两翼”工程：艾美耳球虫独特的生物学和免疫学特性是其作为真核载体疫苗研发的基础，是“一体两翼”的主体。2）艾美耳球虫载体自身和异源抗原表达时空的设计与优化构成了载体疫苗效能提升的“两翼”。3）载体-抗原协同优化是显著增强真核载体疫苗激发宿主保护性免疫应答强度的集成。综上，艾美耳球虫作为真核疫苗载体具有可行性，随着基因编辑技术、合成生物学、计算疫苗学和递送技术的融合发展，艾美耳球虫真核载体疫苗系统有望突破实验室研究阶段，在畜禽疫病防控等领域实现转化应用，也为其他真核载体疫苗的研发提供参考。
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五倍子颗粒对靶动物蛋鸡的安全性评价
《中国兽医科学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为了评价五倍子颗粒对靶动物蛋鸡的安全性,在3组海兰褐蛋鸡中分别饲喂1、3或5倍推荐剂量的五倍子颗粒,同时设置空白对照组,观察蛋鸡的生产性能变化,并测定蛋品质及血液生理生化指标,测定脏器指数和肠道通透性,观察病理组织学变化.结果显示,试验各组临床体征均正常,与空白对照组相比,体重、生产性能、蛋品质、血液生理生化指标及脏器指数均无显著性差异,剖检以及组织显微结构未发现病变;肠道通透性检测显示,高剂量组空肠上皮紧密连接蛋白基因(CLDN1)和回肠上皮闭合蛋白基因(OCLN)表达显著上调(P<0.05);中剂量组回肠上皮紧密连接蛋白基因(CLDN1)和闭合蛋白基因(OCLN)表达显著上调(P<0.05).上述结果表明,五倍子颗粒在0.5g/kg剂量以下使用是安全的,且具有强化肠道屏障的作用.
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玉米ZmKL1优异等位基因调控籽粒大小的效应评估及分子机制解析
《作物学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为评估玉米籽粒大小调控基因ZmKL1不同等位基因对农艺性状的效应,解析其调控籽粒大小的分子机制,本研究构建了近等基因系(NIL),在2个地点调查其田间表型、穗部及籽粒表型,并进行转录组与蛋白组测序,共同解析不同等位基因对籽粒大小的调控效应。结果显示, NIL群体在粒长、粒宽、百粒重、株高及穗位高方面存在显著差异,花期及穗部表型等方面无差异。2组NIL间差异表达基因总数为744个、差异表达蛋白总数为152个。GO分析发现差异表达基因富集于蛋白结合、氧化还原酶活性等途径,差异表达蛋白则与转录、基因表达调控、RNA生物合成及代谢调控过程密切相关。进一步利用荧光定量PCR试验对8个关键基因的表达差异进行了验证。本研究对ZmKL1等位基因进行了表型评估,发现ZmKL1优异等位基因在玉米产量性状改良方面具有一定的应用潜力;同时联合转录组与蛋白组初步解析了其调控籽粒大小的机制,为进一步挖掘影响籽粒大小关键基因及通路提供了思路。
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核桃壳静电纺纳米纤维的制备及表征
《材料工程 》 2025 EI 北大核心 CSCD
摘要：本研究以核桃壳为原料,采用静电纺丝方法制备核桃壳纳米纤维.利用扫描电镜(SEM)考察了纺丝参数对纳米纤维形貌和直径的影响,借助傅里叶红外光谱仪(FT-IR)、X射线衍射仪(XRD)、热重分析仪(TGA)、电阻率测试仪对核桃壳纳米纤维结构及性能进行表征.结果表明,在纺丝液浓度55%、纺丝电压16 kV、注射速率0.75 mL/h、接收距离14 cm的条件下,能够纺得表面光滑、直径分布均匀、平均直径0.38 μm的核桃壳纳米纤维,该纳米纤维的结构有序性显著提高,在500℃条件下的热稳定性提高了1.29倍,电导特性也有所改善.
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