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液相色谱—质谱联用分离鉴定长链多不饱和脂肪酸甘油三酯

文献类型： 学位论文

年份： 2015

导师姓名： 魏芳

作者： 吴琳

出版单位： 中国农业科学院

关键词： 液相色谱;质谱;长链多不饱和脂肪酸;甘油三酯;稠环芳烃色谱柱

研究方向： 食品科学

摘要： 多不饱和脂肪酸与人体健康息息相关,尤其是花生四烯酸(Arachidonicacid,ARA)、二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid,EPA)及二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid,DHA)等长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs),在预防和治疗心血管疾病,动脉硬化,癌症,肥胖等疾病方面具有明显效果。长链多不饱和脂肪酸在甘油三酯中甘油骨架上的分布位置有两类:sn-1,3(α)和sn-2(β)。脂肪酸的种类不同及在甘油骨架上酰化位置的不同会对甘油三酯的营养功能造成很大的影响,而不同品种、不同来源油脂甘油三酯中脂肪酸的种类及酰基位置分布也不同。LC-PUFAs TAGs碳链长,双键数目多,结构复杂,同时存在大量的同分异构体和位置异构体,其在色谱柱上的保留行为与低碳链数、低不饱和度的甘油三酯有所不同,传统的分析低碳链数、低不饱和度的甘油三酯的液相色谱方法并不适合用于LC-PUFAs TAGs的分析。本课题拟开展长链多不饱和脂肪酸甘油三酯类复杂化合物高效分离分析方法的研究。首先分别采用Florisil固相萃取柱和氨基固相萃取柱联用气相色谱测定了5种不同来源油脂中sn-2位脂肪酸组成及含量,研究了这五种油脂中sn-2位脂肪酸的分布特点。为了进一步鉴定油脂中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯分子种类,本文建立了一种液相色谱-质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法,选择了一种聚合物键合的C18色谱柱-稠环芳烃色谱柱(PAH柱),该色谱柱除了可以提供疏水作用之外,其固定相中“槽式结构”具有分离长链多不饱和脂肪酸甘油三酯异构体的能力。将所建立的方法应用于海豹油中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的定性分析。研究结果如下:1.研究了5种不同来源的油脂(植物油、藻油、微生物油、鱼油和海洋性哺乳动物油)脂肪酸组成及sn-2位脂肪酸组成及含量。结果发现,植物油脂肪酸组成简单,微生物油、藻油、鱼油及海豹油中脂肪酸种类较多,含有大量的长链多不饱和脂肪酸。植物油中sn-2位脂肪酸多为不饱和脂肪酸,海豹油中LC-PUFAs多分布于sn-1,3位,而鱼油中LC-PUFAs多分布于sn-2位。2.研究了PAH色谱柱的保留行为,并优化了甘油三酯的分离条件。结果发现PAH色谱柱同时具有“槽式结构”和疏水相互作用;具有相同酰基碳数的甘油三酯在该色谱柱上的保留取决于甘油三酯的双键数,双键数目越多,保留越弱,出峰时间越快,因此,PAH色谱柱非常适合用于长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的快速分离;此外由于该色谱柱固定相中”槽式结构”和疏水相互作用,成功实现了具有平面结构差异的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的分离。3.建立了一种银离子固相萃取和PAH-LC/APCI-MS联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法,并对银离子固相萃取条件进行了优化;在应用该方法鉴定海豹油中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分子种类时,共鉴定出了双键数为4~9的113种长链多不饱和脂肪酸甘油三酯分子,其中包括8对ABA/AAB型和21对ABC/BCA型的TAG酰基位置异构体。该方法简单实用,可用于多种油脂中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分析鉴定。

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