文献类型： 中文期刊

作者： 杨宇轩 ¹ ; 袁红 ² ; 焦云娟 ² ; 王涛 ³ ; 高洁 ² ; 李坤 ² ; 李平花 ² ; 孙普 ² ; 卢曾军 ² ; 白兴文 ² ; 郜原 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学生命科学技术学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省病原生物学基础学科研究中心动物疫病防控全国重点实验室

3.兰州大学动物医学与生物安全学院

关键词： FGF21;骆驼;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 1079-1086

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列（XM＿010996368.2），删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因，通过Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点嵌入p ET-28a（+）表达载体，获得重组表达质粒p ET-28a(+)-FGF21-His，转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行重组蛋白FGF21的表达，通过镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。将重组蛋白FGF21与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔，制备家兔源多克隆抗血清，利用protein A亲和层析纯化柱纯化多克隆抗体，利用SDS-PAGE技术分析纯化多克隆抗体的纯度，利用Western-blot和间接ELSIA方法验证纯化多克隆抗体的反应性。结果表明，成功表达并纯化出骆驼重组蛋白FGF21，以其免疫家兔后制备并纯化出抗FGF21的特异性多克隆抗体。本研究为建立ELISA方法检测骆驼FGF21蛋白提供了材料，为阐明FGF21在骆驼糖脂代谢中的功能机制奠定了基础。