文献类型： 中文期刊

作者： 葛晨晨 ¹ ; 尚超 ² ; 张翠玲 ² ; 芦静 ¹ ; 李太元 ¹ ; 李霄 ² ; 金宁一 ² ;

作者机构： 1.延边大学农学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所

关键词： 新型冠状病毒;木瓜样蛋白酶;Ⅰ型干扰素;天然免疫

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2021 年 010 期

页码： 1129-1133,1138

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的探讨新型冠状病毒（SARS-CoV-2）木瓜样蛋白酶（PLpro）对Ⅰ型干扰素免疫应答的调节作用。方法基于新型冠状病毒PLpro利用MEGA7.0构建SARS-CoV-2 PLpro进化树,并进行同源性分析;PCR扩增PLpro基因,并克隆至真核表达载体pcDNA3.1（+）中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-PLpro。转染293细胞,采用Western blot和间接免疫荧光试验验证pcDNA3.1-PLpro的表达。通过qRT-PCR分析PLpro对Poly （I:C）刺激下炎性细胞因子mRNA表达的影响;双荧光素酶报告基因试验检测PLpro对IFN-β通路的影响。结果 SARS-CoV-2 PLpro蛋白序列与SARS PLpro相似性为82.7%,与蝙蝠冠状病毒PLpro相似性为96.8%。PCR扩增出PLpro目的基因片段长度为957 bp,与预期相符合,并在293细胞中表达。PLpro抑制IFN-β荧光素酶活性,同时抑制Poly （I:C）刺激引起的IFN-α、IFN-β、IL-6 mRNA表达升高。结论 SARS-CoV-2的PLpro抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素免疫应答,为病毒逃逸宿主天然免疫反应提供有利条件。