文献类型： 中文期刊
作者： 杨燕 1 ; 胡哲 1 ; 郭奎 1 ; 张泽楠 1 ; 薛红 1 ; 黄雪英 1 ; 沈丹 1 ; 王晓钧 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室;广州市动物卫生监督所
关键词： 非洲马瘟;阳性血清;ELISA;标准样品
期刊名称： 中国农业大学学报
ISSN： 1007-4333
年卷期： 2024 年 29 卷 005 期
页码： 74-80
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备非洲马瘟病毒VP7蛋白ELISA阳性血清标准样品,筛选一匹无常见马属动物疫病抗体的马作为靶动物,利用大肠杆菌原核表达系统制备的VP7蛋白为免疫原,将免疫原与MONTANIDE ISA35佐剂等体积混合乳化后,每两周免疫1次,共进行3次免疫,每周采集血清,检测其血清抗体ELISA效价.在血清效价高时大量采血分离血清,验证其无菌性,并将高效价血清进行冻干,参照《中华人民共和国兽药典》中的方法对该血清进行特异性检验、无菌检验、均一性评估和稳定性评估.结果表明:1)在免疫后第3周,可以检测到免疫马体内的非洲马瘟抗体.2)特异性结果显示马流感病毒、马疱疹病毒Ⅰ型、马疱疹病毒Ⅱ型、马疱疹病毒Ⅳ型、马动脉炎病毒、马传染性贫血病毒、马链球菌、马流产沙门菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、马驽巴贝斯虫和马泰勒虫抗体检测结果均为阴性.说明制备的标准血清背景干净,无常见马属动物疫病抗体.3)无菌检验结果显示酪胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基和硫乙醇酸盐液体培养基上均无杂菌生长,说明制备的血清中无细菌和真菌等微生物污染.4)稳定性评估结果显示制备的血清在4、25和37 ℃环境下可稳定保存2个月,在-20和-80 ℃环境下可稳定保存6个月.综上,本研究成功制备了非洲马瘟病毒VP7蛋白ELISA阳性血清标准样品,该标准样品的制备为非洲马瘟的相关研究奠定理论基础.
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