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DF-1细胞ANP32A基因缺失株的基因编辑及其对AIV复制的抑制效应

文献类型： 中文期刊

作者： 魏天悦 1 ; 于萌萌 1 ; 王震 1 ; 谢雨杭 1 ; 王晓钧 1 ; 夏长友 1 ; 孟庆文 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： CRISPR/Cas9;chANP32A;腺病毒;H9N2禽流感病毒;抑制

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 54 卷 011 期

页码： 1437-1442

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 禽流感病毒（AIV）能劫持宿主ANP32A蛋白与流感病毒聚合酶结合，促进AIV复制，但chANP32A调节流感病毒复制的分子机制尚存在诸多未知。本研究利用腺病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术，靶向chANP32A 129位氨基酸（AA）设计、合成了sgRNA序列，构建Ad-SpCas9腺病毒载体、包装腺病毒。以重组腺病毒感染的DF-1细胞经亚克隆培养、PCR扩增和基因组测序，鉴定到3株缺失6、21、24个碱基的细胞株。以H9N2禽流感病毒感染细胞，RT-qPCR结果显示，KO-6、KO-21、KO-24细胞株的病毒基因组RNA拷贝数显著降低；TCID50测定病毒生长曲线，病毒滴度显著下降；流感病毒双荧光素酶报告系统测定聚合酶活性，结果显示缺失细胞株流感病毒聚合酶活性降低30～3 000倍。研究发现，KO-6、KO-21细胞株抑制AIV复制，KO-24细胞株显著抑制AIV复制，缺失chANP32A 125～132 AA更显著抑制AIV复制。本研究为chANP32A基因功能研究以及研发具有抗禽流感病毒且chANP32A生物学功能不改变的基因编辑鸡奠定了基础。

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