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玉米叶肉原生质体瞬时表达系统建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 吕仁瑶 1 ; 朱金洁 2 ; 刘昌林 2 ; 谢传晓 2 ; 邹华文 1 ; 祁显涛 2 ;

作者机构： 1.长江大学农学院

2.中国农业科学院作物科学研究所

关键词： 玉米;原生质体;瞬时转化;亚细胞定位;ZmDHDPS

期刊名称： 玉米科学

ISSN： 1005-0906

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 32-39

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以玉米B73黄化苗叶片为研究材料，采用酶解法分离并获得高活性的玉米叶肉原生质体细胞，优化PEG-Ca2+介导的玉米叶肉原生质体细胞转化条件，探索电击介导玉米叶肉原生质体细胞瞬时转化方法。同时，以荧光蛋白为报告分子融合细胞器定位信号，建立玉米叶肉原生质体亚细胞定位系统，进一步验证该瞬时表达系统具备可用于基因功能研究的可能性。结果表明，通过酶解法分离获得的玉米叶肉原生质体细胞经过FDA染色统计发现，95%的细胞结构完整且活力较高。在PEG-Ca2+介导瞬时转化方法中，当PEG浓度40%且质粒量增加至25μg时转化效率达到最高，为51.28%。在电击介导瞬时转化方法中，当电压为350 V且电击时间为5 ms的条件下电击转化效率最高，为32.66%。通过将核定位信号NLS与eGFP基因融合转入玉米叶肉原生质体细胞，e GFP成功定位于细胞核。通过将叶绿体定位基因ZmMSH1与DsRed2基因融合并转入，DsRed2蛋白成功定位于叶绿体中。在玉米叶肉原生质体细胞中过表达ZmDHDPS基因，通过qRT-PCR和Western Blot等技术确定了ZmDHDPS高表达活性，并显著提高原生质体细胞内游离赖氨酸含量。

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