文献类型： 中文期刊

作者： 黄灵芝 ¹ ; 符晓 ² ; 祁显涛 ² ; 刘昌林 ² ; 谢传晓 ² ; 吴鹏昊 ¹ ; 任姣姣 ¹ ; 朱金洁 ² ;

作者机构： 1.新疆农业大学农学院

2.中国农业科学院作物科学研究所

关键词： Cas12f;sgRNA/Cas12核糖核蛋白复合体;原生质体;编辑效率

期刊名称： 作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2024 年 50 卷 010 期

页码： 2425-2434

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 来自Type V-F家族的CRISPR/Cas12f蛋白报道仅为Cas9蛋白分子的1/4到1/3大小,在病毒载体的递送上具有重要优势。然而,CRISPR/Cas12f系统介导植物基因编辑的报道较少,编辑活性相对较低,限制了该系统在植物上的进一步应用。本研究分别在体外酶切、酵母以及玉米原生质体瞬时表达3个体系中比较了OsCas12f、SpCas12f及UnCas12f的编辑活性。结果表明,基于Cas12f/sgRNA的体外酶切, OsCas12f与SpCas12f蛋白的编辑活性相当,未检测到UnCas12f对底物酶切活性;在酵母突变eGFP的恢复表达试验中,OsCas12f在2个测试位点对eGFP蛋白的表达恢复效率达到95%以上,效率与Cas12i.3相当; SpCas12f介导的2个位点eGFP蛋白表达恢复效率分别是1.63%与3.20%,效果次之; UnCas12f蛋白几乎无编辑活性;玉米原生质体瞬时表达比较OsCas12f和SpCas12f介导的玉米内源位点的编辑效率,发现OsCas12f对2个位点的编辑效率分别为2.72%和1.97%,而SpCas12f仅能介导其中1个位点的定点编辑,编辑效率为1.09%。Cas12f蛋白在靶位点处引入的突变类型以碱基的缺失为主,缺失碱基长度在–9～–17 bp之间。综上, OsCas12f可以作为植物微型基因编辑器及衍生技术开发的底盘工具酶。