文献类型： 中文期刊

作者： 李亚军 ¹ ; 茹毅 ² ; 郝荣增 ² ; 蒋成辉 ² ; 王伟 ² ; 张越 ² ; 张贵才 ² ; 刘华南 ² ; 卢炳州 ² ; 杨洋 ² ; 陶世宇 ² ; 杨锐 ² ; 宋向东 ² ; 陈娇 ² ; 余四九 ¹ ; 郑海学 ² ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E2蛋白;真核表达;CHO悬浮培养;免疫原性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 4315-4324

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）E2蛋白，并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础，构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2,转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达，收集细胞培养上清，进行亲和层析法纯化，SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化，Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性，利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔，用细胞间接免疫荧光（IFA）和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性。纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL^-1;Western blot结果显示，利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带；新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平达到1∶1 024 000;IFA试验结果显示，该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达，进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性。本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性，为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。