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猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 乔祖健 1 ; WANG Liang 2 ; 李媛 2 ; CHEN Chao 1 ; 辛九庆 2 ; LI Ji-chang 2 ;

作者机构： 1.东北农业大学动物医学院

2.中国农业科学院

关键词： 猪肺炎霉形体;伴侣蛋白DnaK;热休克蛋白70;单克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2008 年 38 卷 08 期

页码： 701-706

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别。以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠。筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11。Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应。抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF11分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链。相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位。

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