您好，欢迎访问中国农业科学院 机构知识库！

全部

  • 全部
  • 标题
  • 学者
  • 机构
  • 关键词

牛支原体和丝状支原体丝状亚种双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 马芷忻 1 ; 武琪 1 ; 刘桐 1 ; 辛九庆 1 ; 徐青元 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 牛传染性胸膜肺炎;牛支原体;TaqMan荧光定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 262-268

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病均为重要的牛传染病，两者均可致牛出现呼吸系统症状，临床上难以区分。为建立鉴别诊断牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病的双重Taq Man荧光定量PCR检测方法，本研究根据这两种病的病原丝状支原体丝状亚种和牛支原体的基因组保守区域（丝状支原体丝状亚种nt826-nt1 742，牛支原体nt189-nt618）分别设计引物与探针，通过优化反应体系与反应条件，建立同时检测这两种病原的Taq Man荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示，该方法仅对丝状支原体丝状亚种模拟样品和牛支原体检测结果为阳性，而巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒、无乳支原体、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、关节炎支原体Leachii株检测结果均为阴性，特异性较强。分别以1.0×10~7拷贝/μL～1.0×10~1拷贝/μL的p EASY-Mmm和p EASY-Mb质粒标准品为模板，进行敏感性试验，结果显示，该方法对丝状支原体丝状亚种和牛支原体重组质粒标准品的检测限均为1.0×10~1拷贝/μL，敏感性较高。对不同浓度质粒标准品混合物的重复性试验结果显示，组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5%，重复性较好。利用该方法对112份临床样品（104份鼻拭子、8份肺组织样品）检测，结果显示，丝状支原体丝状亚种检测结果和已发表PCR方法检测结果一致，均为阴性，而本实验建立的方法检测出4份牛支原体阳性样品，且经测序证实检出样品为真实阳性样品，而已发表的多重PCR方法检测该病原结果均为阴性。本研究建立了能够同时检测丝状支原体丝状亚种和牛支原体的双重Taq Man荧光定量PCR方法，其特异性强、敏感性高、重复性好，可用于各种临床样品的检测，为这两种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

  • 相关文献

[1]牛支原体套式PCR检测方法的建立. 李媛,董惠,张美晶,陈超,曹培丽,郭丹,姜海芳,辛九庆. 2009

[2]猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 郝立沙,张璐,佟杰,于颖,杨莹莹,张武超,涂亚斌,蔡雪辉. 2015

[3]乙型流感病毒TaqMan荧光定量PCR分型检测方法的建立及初步应用. 赵文欣,朱翔宇,肖妍,韩继成,哈卓,张赫,谢宇飚,鲁会军,金宁一. 2024

[4]TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数. 李凯,高宏雷,高立,祁小乐,高玉龙,徐延伟,王笑梅. 2011

[5]猪流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立. 霍红,李业南,薛遥,郭立平,王晓磊,步志高,华荣虹. 2014

[6]A型猪塞内卡病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立. 李秀博,刘存,鄢明华,崔玉东,崔尚金. 2019

[7]TaqMan荧光定量PCR检测滑液囊支原体方法的建立及其感染鸡血液内载量测定. 朱悦,祁晶晶,武梦思,张广冻,丁思羽,陈玥彤,高崧,于圣青. 2024

[8]TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立. 马震,原李刚. 2011

[9]丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ N末端基因克隆与序列分析. 辛九庆,高玉龙,李媛,王砚范. 2004

[10]丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白QN末端基因的表达、纯化与抗原性分析. 高玉龙,辛九庆,李媛,王砚范. 2005

[11]Mycoplasmamycoidessubsp.mycoidesBen-1株一个新的膜蛋白的特性研究. 周玉梅,汪洋,李媛,邹晓辉,刘素丽,白帆,吴金迪,辛九庆. 2014

[12]丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q N末端基因的表达、纯化与抗原性分析. 高玉龙,辛九庆,李媛,王砚范. 2005

[13]牛霉形体PCR检测方法的建立. 李媛,董惠,张美晶,陈超,曹培丽,郭丹,姜海芳,辛九庆. 2009

[14]丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白QN末端基因的表达、纯化与活性分析. 高玉龙,辛九庆,李媛,王砚范. 2005

[15]丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建. 高玉龙,辛九庆,李媛,王砚范. 2006

[16]丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议. 辛九庆,高玉龙,杨婉容,王砚范. 2002

[17]基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立. 闫磊,潘巧,赵雅芝,郝文君,李媛,辛九庆. 2019

[18]牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定. 李媛,陈维,呼太飞,刘洋,宋志强. 2011

[19]丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQN末端基因克隆与序列分析. 辛九庆,高玉龙,李媛,王砚范. 2004

[20]丝状支原体丝状亚种SC型中国不同地区分离株脂蛋白Q基因的分子特征. 高玉龙,辛九庆,李媛,王砚范. 2006

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：中国农业科学院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台