文献类型： 中文期刊
作者： 陈艳 1 ; 王飞飞 2 ; 杨焕良 2 ; 乔传玲 2 ; 陈化兰 2 ; 张秀英 1 ;
作者机构： 1.东北农业大学动物医学学院
2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室
关键词： H3N2;猪流感病毒;单克隆抗体;噬菌体展示;抗原表位
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN：
年卷期： 2021 年 006 期
页码： 633-638
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备H3N2亚型猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的特异性单克隆抗体（MAb）并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制（HI）试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株（3F8）,经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1.106;HI试验检测结果显示其效价为12 log2。利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"（E1）、"WPFHHHR"（E2）,"IERGRTS"（E3）,3个7肽序列经比对显示与H3N2 SIV HA1蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位（E1）、196、199、200位（E2）、276、279、282位（E3）,即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致。本研究制备了SIV H3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持。
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