文献类型： 中文期刊
作者： 卢全有 1 ; 张建平 2 ; 孙鑫 2 ; 杨磊 3 ;
作者机构： 1.江苏科技大学生物技术学院;农业部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院蚕业研究所
2.;江苏科技大学生物技术学院;农业部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院蚕业研究所
3.;江苏科技大学生物技术学院;农业部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院蚕业研究所;
关键词： 桑树皱叶病毒;外壳蛋白基因;稀有密码子;原核表达;抗血清
期刊名称： 蚕业科学
ISSN： 0257-4799
年卷期： 2017 年 03 期
页码： 388-394
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV)是近年从感病桑树中分离鉴定的一种新的桑树病毒,该病毒属于双生病毒科。由于MCLV外壳蛋白基因(cp)序列中含有较多大肠埃希菌(Escherichia mori)BL21(DE3)的稀有密码子而限制了其在大肠埃希菌中的表达。通过人工合成DNA的方法对MCLV cp基因序列进行优化,将其中40个大肠埃希菌稀有密码子变换成同义偏爱密码子,构建优化后的MCLV cp基因的原核表达载体p GEX4T-MCLV CP并转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导及SDS-PAGE电泳鉴定,实现了融合蛋白GST-MCLV CP在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达。通过SDS-PAGE纯化后切胶回收原核表达的融合蛋白GST-MCLV CP,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MCLV CP的多克隆抗体,经间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶4 096,Western blot检测其能与MCLV发生特异性反应。用制备的抗血清对MCLV感染阳性的桑叶样品进行间接ELISA检测,其检出率仅为25%,但将桑叶样品的粗汁液煮沸处理后能显著提高MCLV的检出率,检出率达83.3%。
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