文献类型： 中文期刊

作者： 魏世萌 ¹ ; 毕津豪 ¹ ; 李恩涛 ² ; 焦翠翠 ² ; 闫飞虎 ² ; 王振山 ¹ ; 陈祥 ³ ; 杨松涛 ² ; 彭帅 ⁴ ; 赵永坤 ² ; 夏咸柱 ¹ ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物医学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所

3.江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

4.吉林农业大学食品科学与工程学院

关键词： 新型冠状病毒;细菌样颗粒;细菌表面展示系统;GEM

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2022 年 17 卷 003 期

页码： 254-259,265

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD与乳酸乳球菌锚钩(protein anchor,PA)基因编码的融合蛋白,使其高密度展示在GEM颗粒表面,制备SARS-CoV-2细菌样颗粒并进行鉴定.方法 选取SARS-CoV-2武汉分离株刺突蛋白(S)基因序列,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建带有SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(Receptor Binding Domain,RBD)的重组杆状病毒rBV-RBD-linker-PA3,通过感染昆虫细胞Sf9制备融合蛋白RBD-linker-PA3,使其与GEM(Gram Positive Enhancer Matrix)技术颗粒化的乳酸乳球菌 MG136 结合形成细菌样颗粒(Bacterium-like particies,BLPs)GEM-RLP3.结果 成功合成Linker-PA3(720 bp)和RBD-linker(687 bp)基因片段,并获得转移杆粒DNA,基因组PCR鉴定显示重组杆状病毒构建成功,通过细菌样颗粒间接免疫荧光试验可观察到RBD-GEM的颗粒状绿色荧光信号,表明融合蛋白成功展示在GEM颗粒的表面,SDS-PAGE及Western blot结果表明,成功表达可溶性融合蛋白RBD-linker-PA3并被展示在GEM颗粒表面.结论 成功制备SARS-CoV-2细菌样颗粒,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备SARS-CoV-2 RBD真核蛋白,配合锚钩蛋白利用柔性Linker将RBD高密度的展示在GEM颗粒表面,为新型疫苗的开发提供了新思路.