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蛋鸡子宫内膜上皮细胞分离培养和鉴定及其衰老模型的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 瞿源 1 ; 邵丹 2 ; 杨海明 1 ; 童海兵 2 ;

作者机构： 1.扬州大学动物科学与技术学院

2.中国农业科学院家禽研究所

关键词： 子宫内膜上皮细胞;体外细胞培养;衰老模型;蛋鸡

期刊名称： 动物营养学报

ISSN： 1006-267X

年卷期： 2024 年 36 卷 012 期

页码： 8041-8048

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立蛋鸡子宫内膜上皮细胞的原代培养方法，并利用D-半乳糖（D-gal）构建蛋鸡子宫内膜上皮细胞体外衰老模型。试验选用产蛋高峰期（35周龄）蛋鸡子宫内膜组织为研究对象，刮取蛋鸡子宫内膜，使用Ⅰ型胶原酶消化，体外分离培养蛋鸡子宫内膜上皮细胞，通过形态学观察及细胞免疫荧光（IF）对细胞进行鉴定。添加不同浓度（0、8、16、32、64 mg/mL）的D-gal干预子宫内膜上皮细胞，通过观察细胞形态，测定干预24 h后的细胞活率，采用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测蛋鸡子宫内膜上皮细胞的细胞衰老阳性率，筛选出D-gal的最佳干预浓度。结果显示：1）利用刮取结合酶消化法培养的蛋鸡子宫内膜上皮细胞形态呈铺路石状。2）通过免疫荧光技术，运用兔抗细胞角蛋白18(CK18)作为一抗，对蛋鸡子宫内膜上皮细胞进行鉴定，结果呈阳性，纯度达90%以上。3）与对照组相比，8、16、32、64 mg/mL D-gal组的细胞存活率均显著降低（P<0.05）,32 mg/mL组的存活率仅剩47.87%。4）与对照组相比，不同浓度D-gal组细胞衰老阳性率显著增加（P<0.05）,16 mg/mL D-gal组的细胞衰老阳性率为41.08%。综上所述，本研究使用的方法能够成功分离、纯化培养并鉴定出原代蛋鸡子宫内膜上皮细胞，采用16 mg/mL D-gal处理24 h子宫内膜上皮细胞可成功构建其衰老模型。

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