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活性口袋关键色氨酸对几丁质酶Chi304催化性质的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 田晓倩 1 ; 卢海强 1 ; 伍宁丰 2 ; 田健 2 ; 关菲菲 2 ;

作者机构： 1.河北农业大学食品科技学院

2.中国农业科学院生物技术研究所

关键词： 几丁质酶;定点突变;几丁寡糖;理性设计

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 76-82

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 几丁质酶中存在结合口袋及水解活性位点，关键氨基酸与底物几丁质的结合可调控酶的水解活性。以嗜热几丁质酶Chi304为研究材料，采用同源建模分析其高级结构，发现在其底物结合口袋附近存在2个色氨酸（W140与W272），将其定点突变为丙氨酸后，采用高效液相色谱检测酶的水解产物，并进一步分析水解产物三乙酰壳三糖（DP3）与二乙酰壳二糖（DP2）的比例（DP3/DP2），用于评估突变体的效果。结果表明，突变体W140A、W272A与W140/272A水解胶体几丁质产物DP3/DP2分别较野生型提升23.3%、45.7%与80.0%。由此表明，W140与W272是影响酶与底物结合的关键氨基酸，将其突变为丙氨酸可提升Chi304的内切活力，降低外切活力。

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