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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测

文献类型： 中文期刊

作者： 卢全有 1 ; 吴祖建 2 ; 夏志松 1 ; 谢联辉 2 ;

作者机构： 1.中国农业科学院蚕业研究所

2.福建农林大学植物病毒研究所

关键词： 桑花叶卷叶病相关病毒;外壳蛋白基因;原核表达;抗血清;酶联免疫吸附试验间接法

期刊名称： 蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2015 年 41 卷 02 期

页码： 218-225

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模板,采用RT-PCR获得编码该病毒外壳蛋白C端38 k D的核苷酸序列片段,暂命名为CP38。将CP38连接到原核表达载体构建重组表达载体p GEX-4T-CP38,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经1 mmol/L IPTG诱导,使融合蛋白GST-CP38高效表达。通过SDS-PAGE胶回收原核表达的融合蛋白,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MMLRa V的多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶2 048,Western blot检测其能够与MMLRa V发生特异性反应。用制备的抗血清对感病桑树叶片粗汁液煮沸后离心获得的上清液进行间接ELISA检测,MMLRa V的检出率达到84%,可以应用于大田病样的检测。

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