文献类型： 中文期刊

作者： 梁彤 ¹ ; 曹存 ¹ ; 于德斌 ¹ ; 王芳 ¹ ; 姜志刚 ¹ ; 徐晓静 ¹ ; 刘春东 ¹ ; 尹鑫 ¹ ; 常继涛 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队

关键词： 牛冠状病毒;分离;鉴定;S1蛋白编码基因;序列分析

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 019 期

页码： 82-87,141

收录情况： 北大核心

摘要： 为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定，并进一步丰富我国牛冠状病毒（BCoV）的种质资源和流行病学数据，试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征，同时通过序列比对分析与GenBank中具有代表性的BCoV S1基因组序列的同源性，利用MEGA 7.0.14软件构建S1基因组系统进化树。结果表明：9份样本中有2份为BCoV N基因阳性，PCR扩增得到大小约为730 bp的目的条带；用阳性样本接种HRT-18G细胞并进行3次传代培养，可见细胞出现以变圆、融合形成合胞体、融合细胞脱落为主要特征的典型细胞病变；分离株能够与兔抗BCoV N蛋白的多克隆抗体发生特异性反应，透射电镜观察可见有囊膜、表面有纤突、直径约为120 nm的病毒粒子；将分离获得的BCoV毒株命名为HM-XC,该分离株感染HRT-18G细胞的病毒含量为1×10^5.75 TCID₅₀/0.1 mL;分离株HM-XC S1基因的核苷酸序列与我国青海省牦牛源毒株BCoV Yak/BCoV-China/QH1的相似性最高，为99.61%,与近年来辽宁省流行毒株的相似性为96.4%～99.0%,与美国经典参考毒株BCoV Mebus的相似性较低，为96.3%;与相似性最高的Yak/BCoV-China/QH1毒株相比，分离株HM-XC的S1蛋白存在7个氨基酸突变，分别是H115D、S186W、Y509H、V528A、N531D、L563S和I640T。说明内蒙古地区牛场中已有BCoV的流行，并且在犊牛腹泻粪便中分离获得BCoV内蒙古流行毒株，分离株具有我国新流行BCoV株的序列特征。