文献类型： 中文期刊

作者： 闫伟 ¹ ; 杨娜 ¹ ; 毛若雨 ¹ ; 王秀敏 ¹ ; 郝娅 ¹ ; 马炫炫 ¹ ; 滕达 ¹ ; 王建华 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院饲料研究所

关键词： 噬菌体裂解酶Lysep3;毕赤酵母;重组表达;肠炎沙门氏菌;抗菌活性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 004 期

页码： 1018-1027

收录情况： 北大核心

摘要： 试验以突破噬菌体裂解酶Lysep3应用瓶颈为切入点,采用酵母表达系统对其进行重组表达以期降低生产成本,同时初步探究其体外抗菌活性和安全性,以期为临床试验提供数据参考.根据毕赤酵母密码子偏爱性优化并合成Lysep3基因,将其连接至表达载体pPICZαA.经菌落PCR和测序验证后,将线性化重组载体pPICZαA-Lysep3电转化巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris X-33.重组酵母转化子经菌落PCR和摇瓶水平甲醇诱导重组蛋白初筛后,在5 L发酵罐中高密度发酵,发酵上清液经His-trap HPGE纯化柱纯化.通过抑菌试验和浊度试验进行rLysep3的抑菌活性分析,通过测定rLysep3对巨噬细胞RAW264.7细胞毒性和小鼠血红细胞溶血性进行rLysep3的安全性分析.结果显示,重组菌在5 L发酵罐中甲醇诱导120 h后Lysep3的表达量达749.2 mg/L.抑菌活性分析发现,rLysep3对肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪葡萄球菌及无乳链球菌均具有抑菌活性,且rLysep3可与EDTA联合作用使肠炎沙门氏菌菌落数下降1.6~1.7个数量级.此外,细胞毒性试验发现,rLysep3在1 024μg/mL浓度下细胞存活率仍可达78.75%;溶血性分析显示,1 024μg/mL浓度下溶血率仅为1.58%.上述结果证明,通过毕赤酵母表达系统实现了Lysep3的重组表达,rLysep3具有体外抑菌活性,且具低细胞毒性和低溶血性.从抗菌活性、产业化制备及安全性等方面初步显示出rLysep3具有开发为临床治疗禽肠炎沙门氏菌感染的新型抗菌药物的潜力.