文献类型： 中文期刊
作者： 郭林 1 ; 王晓杜 2 ; 刘庆伟 3 ; 沈阳 3 ; 邱亚峰 3 ;
作者机构： 1.青岛农业大学动物科技学院
2.浙江农林大学动物科技学院
3.中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室
关键词： 猪流感病毒;NS1基因;基因克隆;基因表达;抗体制备
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2009 年 17 卷 01 期
页码： 22-28
摘要： 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS1全长基因,构建NS1基因原核表达质粒pET-28a-NS1和真核表达质粒p3xFLAG-CMV-NS1,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS1基因,制备抗NS1多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS1转染表达NS1蛋白和病毒感染细胞内的NS1蛋白。经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS1在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS1蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS1多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS1蛋白、转染Vero细胞表达的NS1蛋白和病毒感染细胞内的NS1蛋白。间接免疫荧光发现NS1蛋白主要定位于细胞核。结果显示,本试验成功构建了NS1基因原核和真核表达系统,获得了NS1特异性多克隆抗体,分析了NS1细胞定位,为进一步研究NS1蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。
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