文献类型： 中文期刊

作者： 康磊 ¹ ; 刘珂 ² ; 王建忠 ³ ; 尹才 ⁴ ; 邱亚峰 ² ; 魏建超 ² ; 李蓓蓓 ² ; 邵东华 ² ; 李宗杰 ² ; 粟硕 ¹ ; 马志永 ² ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院免疫学研究所/教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室/江苏省动物免疫学工程实验室

2.中国农业科学院上海兽医研究所

3.苏州市相城区农业技术综合服务中心

4.宁夏动物疾病预防控制中心

关键词： PRRSV;Nsp4;β2M;反向遗传平台;突变毒株

期刊名称： 南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 507-514

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用，以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒，将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5（Nsp4-A80L）突变毒株，并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似；而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达，而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用，并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。