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抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系基因组可转化人工染色体文库的构建与初步筛选

文献类型: 中文期刊

作者: 王晓萍 1 ; 张增艳 1 ; 张群宇 2 ; 刘耀光 2 ; 辛志勇 1 ;

作者机构: 1.中国农业科学院作物育种栽培研究所

2.华南农业大学生物技术学院遗传工程研究所

关键词: 抗黄矮病小麦;中间偃麦草;易位系;基因组;筛选;黄矮病抗性;可转化人工染色体;文库;SCAR

期刊名称: 遗传学报

ISSN: 0379-4172

年卷期: 2002 年 29 卷 8 期

页码: 712-718

收录情况: CSCD

摘要: 利用抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系HW642的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体(transformation-competent artificial chromosome,TAC)文库,文库由2.3×10^6,克隆构成,重组率为90.48%,平均插入片段大小为22kb左右,约覆盖普通小麦单倍体基因组2.5倍,在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是95.77%,文库保存24块96孔板中,每个孔中约含有1000个不同的重组克隆,可以采用Pooled PCR的方法对文库进行筛选,用来源于小麦的简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)引物wms37扩增中间偃麦草,抗病易位及感病材料,得到一条与抗性共分离的特异条带,约450bp,将此特异标记条带转化为SCAR(sequence characterized amplified region),标记,用于筛选HW642基因组TAC文库,得到12个阳性克隆, 对阳性克隆进行了PCR-Southern验证,以中间偃麦草基因组部DNA为探针与限制酶Hind Ⅲ消化后的阳性克隆杂交,其中10个阳性克隆分别有1-6条杂交带,结果表明,这10个阳性克隆可作为抗黄矮病相关基因筛选的候选克隆。

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