文献类型： 中文期刊

作者： 陶世宇 ¹ ; 茹毅 ² ; 陈娇 ² ; 郝荣增 ² ; 李亚军 ² ; 卢炳州 ² ; 石正旺 ² ; 刘学荣 ³ ; 郑海学 ² ; 魏彦明 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.家畜疫病病原生物学国家重点实验室

3.中农威特生物科技股份有限公司

关键词： A型塞内卡病毒（SVA）;病毒结构蛋白2（VP2）;重组串联表位蛋白;可溶性表达;免疫原性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2023 年 006 期

页码： 1284-1295

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： A型塞内卡病毒（Senecavirus A, SVA）是一种新型的小RNA病毒，严重危害我国养猪业的发展。目前尚无有效的SVA疫苗，为探究SVA新型亚单位疫苗，本研究以SVA的病毒结构蛋白2（viral structural protein 2, VP2）基因序列为基础，选取利用生物信息学方法预测的B细胞表位序列及已报道的口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV） 3A蛋白的T细胞表位基因，密码子优化后通过柔性连接肽进行串联连接，分别构建重组表达质粒pET28a-rSVP2-B和pET28a-rSVP2-BT。将原核可溶性表达并纯化的重组串联表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT，经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠（Mus musculus），评价其免疫原性。结果显示，重组质粒转化至大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3），经诱导表达后，目标蛋白均正确表达，SDS-PAGE分析显示，其相对分子质量分别为34和38 kD。Western blot结果显示，rSVP2-B和rSVP2-BT与SVA阳性血清均具有良好的反应原性。纯化后rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠产生的体液免疫水平无显著差异，均诱导产生了较强的特异性IgG抗体及IgG1抗体，且主要诱导偏向于Th2型的体液免疫应答。病毒中和实验结果显示，2种重组蛋白的中和抗体效价介于1∶64～1∶128。同时，rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠也产生了较强的细胞免疫，其中rSVP2-BT免疫组的脾淋巴细胞增殖水平、细胞因子白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）和干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）水平显著高于rSVP2-B。以上结果表明，成功制备了具有良好免疫原性的重组串联多表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT,rSVP2-BT的免疫原性优于rSVP2-B。本研究为SVA多表位疫苗研制提供理论依据。