文献类型： 中文期刊

作者： 李琦 ¹ ; 成莉凤 ² ; 段盛文 ² ; 冯湘沅 ² ; 郑科 ² ; 杨琦 ² ; 刘志远 ² ; 彭源德 ² ;

作者机构： 1.中国农业科学院麻类研究所

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关键词： 木聚糖酶基因;毕赤酵母;真核表达;Western Blot

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 126-130

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xyn A的基础上,将xyn A基因(Gen Bank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到p PICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0. 5%(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶。结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况。结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38. 6 ku,等电点为6. 86; 7个毕赤酵母基因工程菌株X33/p PICZαA-xyn A分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/m L,最高达487. 2 U/m L;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38. 6 ku)略大。一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础。