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水稻酵母双杂交文库构建及PID2胞内结构域互作蛋白的筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 孙一丁 1 ; 杨奕 1 ; 刘畅媛 1 ; 马继琼 1 ; 许明辉 1 ;

作者机构： 1.云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业农村部西南作物基因资源与种质创制重点实验室

关键词： 稻瘟病;酵母双杂交;Pid2;互作蛋白;E3泛素化连接酶

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 3931-3937

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了进一步挖掘水稻PID2胞内互作蛋白质，阐明Pid2介导的稻瘟病抗性机制。本研究利用SMART技术，构建了受稻瘟病诱导后不同时间段的含抗性基因Pid2水稻材料的cDNA文库；通过PCR扩增获得PID2胞内结构域编码片段Pid2-JM，构建了诱饵表达载体pGBK-Pid2-JM，并进一步利用酵母双杂交技术筛选Pid2-JM的互作蛋白。结果表明，构建的cDNA酵母文库细胞密度为9.0×10~7Cells/mL，文库插入片段在500～2 000 bp之间，重组率为100%，诱饵载体无自激活活性；利用诱饵载体经筛选文库后，新发现一个能与Pid2-JM互作的U-box类E3泛素连接酶PBP1，经回转试验验证了PBP1与Pid2-JM可在烟草细胞内互作。综上，本研究成功构建了稻瘟病诱导下的水稻酵母双杂交文库，并筛选到一个能与PID2胞内结构域互作的U-box类E3泛素连接酶，该结果为进一步揭示水稻抗稻瘟病信号转导机制提供参考。

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