文献类型： 中文期刊

作者： 仝力心 ¹ ; 芦延珍 ¹ ; 于瑞明 ¹ ; 张莉萍 ² ; 刘霞 ¹ ; 王永录 ² ; 杜晓华 ¹ ; 刘新生 ² ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 猪德尔塔冠状病毒;猪流行性腹泻病毒;受体结构域;亚单位疫苗

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 2150-2161

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研发出一种可同时预防猪德尔塔冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCo V）和猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）两种病毒病的有效二联亚单位疫苗，本研究将PDCo V的受体结合域（receptor binding domain,RBD）与PEDV的RBD基因进行串联，构建至真核表达载体p CDNA3.1（+）中，利用哺乳动物细胞Expi CHO^TM表达系统表达纯化出PDCo V-RBD-PEDV-RBD （简写为pd RBD-pe RBD）融合蛋白，以3种不同剂量（10、20和30μg）免疫小鼠，利用ELISA和流式细胞术评估该融合蛋白诱导的体液免疫反应和细胞免疫反应，利用病毒微量中和试验测定免疫小鼠血清对PDCo V或PEDV的中和效价。结果表明，3个不同剂量组在加强免疫后均诱发了高水平的Ig G抗体，不同剂量组间抗体水平没有明显差异，说明10μg的免疫剂量即可达到较好免疫效果。流式细胞术检测结果显示，免疫组的CD₃⁺CD₄⁺T细胞比例显著升高，CD₃⁺CD₈⁺T细胞比例相对较低，这符合亚单位疫苗主导机体产生体液免疫反应的预期。同时，对血清中细胞因子白细胞介素-2 （interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-4 （interleukin-4,IL-4）和干扰素-γ （interferon-γ,IFN-γ）的含量进行了检测，结果表明该融合蛋白诱导了良好的体液免疫效果，同时还产生了一定的细胞免疫应答。中和试验结果表明，10μg免疫剂量所诱导的抗体即可在体外有效中和PDCo V和PEDV两种病毒，效价分别为1:179.25和1:141.21。上述研究结果表明，pd RBD-pe RBD融合蛋白10μg免疫剂量即可诱导高水平的体液免疫反应，诱导的抗体可同时中和PDCo V和PEDV两种病毒，说明pd RBD-pe RBD融合蛋白有希望成为一种能同时预防PDCo V和PEDV的有效二联亚单位疫苗。