文献类型: 中文期刊
作者: 李军义 1 ; 刘娣 2 ; 马红 2 ; 汪亮 2 ; 霍秀鹏 1 ; 郝丽 1 ;
作者机构: 1.东北林业大学野生动物与自然保护地学院
2.黑龙江省农业科学院畜牧研究所
关键词: 繁殖性能;CEBPB基因;miR-155
期刊名称: 野生动物学报
ISSN: 2310-1490
年卷期: 2023 年 44 卷 002 期
页码: 305-312
收录情况: 北大核心
摘要: CEBPB具有调节黄体生成促进排卵的作用,对动物繁殖性能极为重要,试验旨在通过构建CEBPB的3'端非翻译区(3'UTR)双荧光素酶报告基因载体,验证Mi-croRNA-155(miR-155)调控CEBPB的分子机制.应用在线生物信息学软件预测miR-155与CEBPB基因 3'UTR的靶向结合区,PCR扩增获取民猪组织基因组的CEBPB的3'UTR,将其插入psi-Check-2载体,构建野生型(wt-3'UTR)和突变型重组表达载体(mut-3'UTR),鉴定正确后,分别与miR-155模拟物(mimics)/抑制物(inhibi-tor)/阴性对照物(NC)共转染到PK15细胞,检测荧光素酶活性及CEBPB表达情况.结果表明:成功构建了CEBPB的3'UTR野生型和突变型表达载体,双荧光素酶报告基因检测显示wt-3'UTR/miR-155 mimics组的萤火虫荧光素酶活性受到显著抑制(p<0.05);而mut-3'UTR/miR-155 inhibitor组的萤火虫荧光素酶相对活性与对照组相比变化不显著(p>0.05).实时荧光定量结果显示,miR-155 mimics组CEBPB、BMP1和PPARG表达水平显著低于miR-155 NC组(p<0.05),而miR-155 inhibitor组CEBPB表达水平高于miR-155 NC组(p<0.05).综上表明,miR-155可以靶向负调控CEBPB的表达.
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