文献类型： 中文期刊

作者： 杨晨 ¹ ; 薛俊欣 ¹ ; 林雅娟 ¹ ; 王小妹 ¹ ; 蒋蔚 ¹ ; 张曼玉 ¹ ; 王权 ¹ ; 孙卫东 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所;中华人民共和国上海海关

关键词： 6-FAM单克隆抗体;生物素-链霉亲和素系统;RPA nfo;胶体金侧向免疫层析试纸条

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 55 卷 012 期

页码： 41-49

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在利用6-羧基荧光素(6-FAM)与6-FAM单克隆抗体、生物素与链霉亲和素之间的特异性结合,制备可用于nfo酶切割探针的重组酶聚合酶(RPA)反应产物结果可视化的胶体金侧向免疫层析试纸条(GICS).通过杂交瘤法和诱生腹水法制备了高亲和力的6-FAM单克隆抗体(亲和力常数为5.38×109 L/mol),再运用高浓度NaCl破坏试验,确定了胶体金与6-FAM抗体的最佳标记pH值为8.0,最佳抗体标记量为12μg/mL,并使用模拟样本确定了最佳检测(T)线包被缓冲液为0.2 mol/L(pH值5.0).然后使用RPA nfo反应产物作为实际样本,观察条带的深浅,最终确定在层析液为0.1 mol/L PB(pH值7.4)、T线包被1mg/mLSA、反应液用量5 μL及金标抗体用量10 μL条件下,能实现试纸条最佳检测性能.自主研发的胶体金侧向免疫层析试纸条在加样5 min后能出现清晰的条带,与目前商品化试纸条的可视化判定结果一致,能替代现有的商品化试纸条,降低检测成本、缩短检测时间,对建立RPA nfo-GICS及RPA-CRISPR Cas12a-GICS检测方法奠定了基础.