文献类型： 中文期刊

作者： 林永玉 ¹ ; 石正旺 ² ; 罗俊聪 ² ; 朱昱茜 ¹ ; 席韬 ² ; 周静 ² ; 张帆 ² ; 石鑫泰 ² ; 王川 ¹ ; 田宏 ² ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 赤羽病病毒;N蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 1548-1558

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备赤羽病病毒（akabane virus,AKAV） N蛋白的单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb），本研究利用原核表达系统表达了AKAV N蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞，采用间接酶联免疫吸附方法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）筛选获得阳性杂交瘤细胞。经3次亚克隆筛选得到两株特异性针对AKAV N蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为2C9与5E9。通过ELISA、免疫印迹（Western blotting）、间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay,IFA）对其进行鉴定。结果显示，成功筛选到特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体。IFA发现其与AKAV N蛋白具有良好的反应性，亚型鉴定试剂盒鉴定2C9 mAb重链为IgG2b型，轻链为κ链；5E9 mAb重链为IgG1型，轻链为κ链；ELISA检测效价均为1:4 096 000。本研究成功制备了两株特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体，为赤羽病诊断方法的开发、疾病的防控以及AKAV N蛋白功能的研究奠定了基础。