文献类型： 中文期刊
作者： 赵霞 1 ; 秦发亮 1 ; 刘文文 1 ; 王锡锋 1 ;
作者机构： 1.植物病虫害生物学国家重点实验室
关键词： 灰飞虱;囊泡相关膜蛋白相关蛋白B;抗体制备;Western blot;免疫荧光标记
期刊名称： 植物保护
ISSN： 0529-1542
年卷期： 2022 年 48 卷 004 期
页码： 220-225,239
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 灰飞虱Laodelphax striatellus的囊泡相关膜蛋白相关蛋白B(VAP-B)是内质网膜蛋白家族的蛋白,其主要参与调节囊泡运输、脂类的转运代谢以及未折叠蛋白应答等.本研究克隆了灰飞虱VAP-B基因,构建了 pCold-SUMO-VAP-B原核表达载体,再将其转化大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3),经过IPTG低温诱导表达得到了含有HIS和SUMO标签的VAP-B可溶性蛋白,经过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后的蛋白再利用rTEV酶去除SU-MO标签,得到无标签的VAP-B蛋白.通过免疫新西兰雄兔制备了 VAP-B的多克隆抗体.Western blot检测结果表明该抗体可以特异性检测到灰飞虱的VAP-B蛋白;同时利用该抗体进行免疫荧光标记,发现其能特异性定位灰飞虱唾液腺内的VAP-B蛋白.研究结果表明制备的VAP-B抗体能够成功用于该蛋白的体内外检测,为阐明VAP-B在灰飞虱体内的关键作用奠定了基础.
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