文献类型： 中文期刊

作者： 王萍 ¹ ; 郝文艳 ¹ ; 曹丽华 ¹ ; 沈开元 ¹ ; 代小丽 ¹ ; 李海艳 ¹ ; 梁贤威 ² ; 石德顺 ¹ ; 李湘萍 ¹ ;

作者机构： 1.广西大学

2.中国农业科学院广西水牛研究所

关键词： ssc-miR-148a;启动子;克隆;bFGF;DNMT1

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2016 年 47 卷 10 期

页码： 1969-1976

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响。结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。0、5和10ng·mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P<0.05),DNMT1 mRNA显著增加(P<0.05)。启动子活性均显著下降(P<0.05),5和10ng·mL-1浓度间无显著差异(P>0.05)。结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控。