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猪可溶性CD40L三聚体蛋白的原核表达及其对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果评价

文献类型: 中文期刊

作者: 贺艳艳 1 ; 陈凌波 1 ; 魏甜 1 ; 滕志东 1 ; 张韵 1 ; 张铭洋 1 ; 马文倩 1 ; 敬晓棋 2 ; 郭慧琛 1 ; 穆素雨 1 ; 孙世琪 1 ;

作者机构: 1.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

2.榆林学院现代农学院

关键词: 5B CD40L;口蹄疫;免疫效果

期刊名称: 畜牧兽医学报

ISSN: 0366-6964

年卷期: 2025 年 56 卷 010 期

页码: 5072-5083

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 旨在评价猪可溶性CD40L三聚体蛋白对口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗的免疫增强效果.本研究将含猪CD40配体(CD40L)三聚体(5B CD40L)基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的重组5B CD40L蛋白偶联FITC后与PBMCs进行反应,使用荧光显微镜研究CD40L蛋白与单核细胞反应的生物活性.进一步将5B CD40L、VLPs和5B CD40L-VLPs免疫豚鼠,通过检测中和抗体、脾淋巴细胞增殖以及实时RT-qPCR评估5B CD40L对VLPs疫苗免疫效果的影响.SDS-PAGE和West-ern blot结果显示,表达的重组5B CD40L蛋白大小约32 ku,确定最佳表达条件为16 ℃、OD600nm值为0.9、0.5 mmol L-1浓度IPTG诱导12 h;流式细胞仪分析表明,重组CD40L蛋白能与猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)表面的CD40蛋白分子结合.5B CD40L联合VLPs可以加速特异性抗体及中和抗体反应,提高脾淋巴细胞增殖水平,并且在5B CD40L-VLPs组中,脾脏细胞的IL-2和INF-γ mRNA显著高于VLPs组.综上所述,5B CD40L具有增强FMD VLPs疫苗体液免疫应答和细胞免疫应答的能力,具有作为疫苗佐剂的潜力.

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