文献类型： 中文期刊
作者： 汤雅萍 1 ; 程毅 1 ; 王吐虹 1 ; 陈佳 1 ; 高春生 1 ; 郭利桃 1 ; 宋志强 1 ; 唐超 1 ; 严准 1 ; 李智敏 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院麻类研究所
关键词： 质粒构建;多片段质粒;酵母同源重组系统
期刊名称： 湖南农业大学学报(自然科学版)
ISSN： 1007-1032
年卷期： 2023 年 49 卷 004 期
页码： 421-427
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源 DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒.通过引物设计在相互连接的DNA片段之间引入 50 bp重叠序列,用PCR扩增DNA片段后,与线性化质粒一起转化酿酒酵母,再用 PCR 和测序等方法鉴定阳性酵母菌落中质粒的正确性.通过本方法构建的多片段质粒正确率高、耗时短.
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