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白地霉ch-3低温脂肪酶基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

作者： 付建红 1 ; 姚斌 2 ; 杨浩萌 2 ; 黄火清 2 ; 石玉瑚 1 ;

作者机构： 1.新疆农业科学院微生物应用研究所

2.中国农业科学院饲料研究所

关键词： 白地霉ch-3;低温脂肪酶;基因克隆;巴斯德毕赤酵母;表达

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2007 年 17 卷 05 期

页码： 25-29

收录情况： CSCD

摘要： 目的:脂肪酶是世界主要工业用酶制剂之一,用基因工程方法克隆与表达白地霉(Geotrichum candidum)ch-3菌株的低温脂肪酶基因。方法:用PCR方法从白地霉ch-3的总DNA中扩增得到一种低温脂肪酶基因lip,将PCR产物连接到pBluescriptⅡSK(+)载体上,测序证明正确后再将基因lip插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9α中,含有目的基因的重组质粒在毕赤酵母中进行诱导表达。结果:毕赤酵母成功表达了lip基因,其活性为37U/mL。SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶蛋白相对分子质量约62kDa,比推测分子量大,lip的表达产物可能被糖基化修饰。初步研究表明:重组脂肪酶最适温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活性,对热敏感。结论:实现了低温脂肪酶在毕赤酵母的成功表达,为进一步研究低温酶催化机制和工业化应用打下基础。

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