文献类型： 中文期刊

作者： 潘知繁 ¹ ; 李思宇 ¹ ; 李玲 ¹ ; 张燕 ¹ ; 华子瑜 ¹ ;

作者机构： 1.重庆医科大学附属儿童医院新生儿科/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿童感染免疫重庆市重点实验室

关键词： 胆红素;分子伴侣介导的自噬;神经毒性;小胶质细胞

期刊名称： 中国当代儿科杂志

ISSN： 1008-8830

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 385-393

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的探讨分子伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy,CMA）对未结合胆红素（unconjugated bilirubin, UCB）诱导的小鼠小胶质细胞BV2损伤的影响。方法 BV2细胞实验分为两部分。（1） CMA激活实验分为：对照组（等体积二甲基亚砜处理）、QX77组（20μmol/L QX77处理24 h）、UCB组（40μmol/L UCB处理24 h）、UCB+QX77组（20μmol/L QX77和40μmol/L UCB共处理24 h）。（2）细胞转染实验分为：LAMP2A沉默对照组（等体积二甲基亚砜处理）、LAMP2A沉默对照+UCB组（40μmol/L UCB处理24 h）、LAMP2A沉默组（等体积二甲基亚砜处理）、LAMP2A沉默+UCB组（40μmol/L UCB处理24 h）。采用改良MTT法检测细胞存活率，蛋白免疫印迹法检测p65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1, caspase-1）蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应法检测炎症因子白细胞介素（interleukin, IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α） mRNA相对表达量，ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-6和TNF-α水平，免疫荧光法检测细胞内p65、NLRP3与热休克同源蛋白70的荧光共定位。结果与UCB组相比，UCB+QX77组细胞存活率升高，炎症相关蛋白p65、NLRP3、caspase-1表达水平降低，炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA相对表达量降低以及IL-6、TNF-α水平降低（P＜0.05）。与对照组相比，UCB组和UCB+QX77组热休克同源蛋白70与p65、NLRP3存在共定位。沉默LAMP2A基因后，与LAMP2A沉默对照+UCB组相比，LAMP2A沉默+UCB组炎症相关蛋白p65、NLRP3、caspase-1蛋白表达水平升高，炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA相对表达量升高以及IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05）。结论 CMA在UCB诱导的BV2细胞损伤中被抑制，激活CMA可能通过降低p65和NLRP3蛋白水平，抑制炎症反应，拮抗胆红素神经毒性。[中国当代儿科杂志，2024,26（4）:385-393]