文献类型： 中文期刊

作者： 梁彤 ¹ ; 曹存 ¹ ; 王芳 ¹ ; 姜志刚 ¹ ; 于德斌 ¹ ; 徐晓静 ² ; 崔久辉 ³ ; 贾斌 ⁴ ; 尹鑫 ¹ ; 常继涛 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室牛羊传染病研究创新团队

2.内蒙古农业大学兽医学院

3.呼伦贝尔农垦谢尔塔拉农牧场有限公司

4.黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院

关键词： 牛冠状病毒;原核表达;N蛋白;单克隆抗体

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 006 期

页码： 120-127

摘要： 为表达牛冠状病毒(BCoV)N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体，将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST，利用大肠杆菌BL21(DE3)表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示，N蛋白主要以可溶性形式表达，分子量约为77 kDa，亲和纯化后纯度为90%。Western blot进一步鉴定发现，重组N蛋白与全病毒多克隆抗体具有良好的反应原性。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠，进行融合、筛选获得3株单克隆抗体，分别命名为1D11、5C2和2B11。细胞上清单克隆抗体效价均达1∶320，3株单克隆抗体均属IgG亚类，Western blot与IFA鉴定3株单克隆抗体与真核表达的N蛋白具有特异性反应。该研究内容为进一步研究N蛋白的结构、功能及建立快速诊断BCoV方法奠定了基础。