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水稻OsSH3P2短肽多克隆抗体的制备和鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 王昱澎 1 ; 谢云杰 1 ; 余想珍 1 ; 林悦龙 1 ; 罗曦 1 ; 肖晏嘉 1 ; 蔡秋华 1 ; 谢华安 1 ; 张建福 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院水稻研究所

关键词： 短肽;多克隆抗体;OsSH3P2;肽链结构

期刊名称： 科学通报

ISSN： 0023-074X

年卷期： 2022 年 67 卷 013 期

页码： 1449-1458

收录情况： EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 特异性抗体的成功制备是研究蛋白功能的重要环节,目前短肽抗体制备技术在动物中的应用 日益成熟,然而该项技术在植物中的应用甚少.本研究通过分析水稻OsSH3P2蛋白的抗原表位、亲水性以及同源蛋白氨基酸序列,同时利用RoseTTAFold系统进行蛋白模型预测.选取了3条序列特异、亲水性高、具有抗原表位和不同肽链结构的氨基酸序列,通过人工合成短肽抗原、偶联KLH载体蛋白后,免疫新西兰大白兔制备得到相应多克隆抗体.经酶联免疫吸附测定检测获得了3份Anti-OsSH3P2-1#、Anti-OsSH3P2-2#、Anti-OsSH3P2-3#高效价短肽多克隆抗体血清.用免疫印迹(Western blotting)方法对OsSH3P2原核重组蛋白和植株内源的OsSH3P2蛋白进行检测,以进一步确定短肽抗体的特异性.结果显示,由不含α-螺旋和β-折叠结构的肽段作为抗原,免疫制得的Anti-OsSH3P2-1#短肽多克隆抗体能有效识别OsSH3P2蛋白,且不受同源蛋白干扰,说明该抗体具有较高的免疫特异性.OsSH3P2短肽多克隆抗体的成功制备,为进一步挖掘OsSH3P2生物学功能奠定基础,且为植物短肽抗体制备提供新的思路.

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